細胞復蘇的原則-快速融化：必須將凍存在-196℃液氮中的細胞快速融化至37℃，使細胞外凍存時的冰晶迅速融化,，避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結晶,，對細胞造成損害。MVE液氮罐

　　一,、 實驗前準備：

　　1,、將水浴鍋預熱至37℃

　　2、用75%酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺臺面,。

　　3,、在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管,、培養(yǎng)瓶等等,。

　　二、取出凍存管：

　　1,、根據(jù)細胞凍存記錄按標簽找到所需細胞的編號,。

　　2、從液氮罐中取出細胞盒,，取出所需的細胞,，同時核對管外的編號,。

　　三、迅速解凍：

　　1,、迅速將凍存管投入到已經(jīng)預熱的水浴鍋中迅速解凍,，并要不斷的搖動，使管中的液體迅速融化,。

　　2,、約1-2min后凍存管內液體完全溶解，取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁,，再拿入超凈臺內,。

　　四、平衡離心：

　　用架盤天平平衡后,，放入離心機中3000r/min 離心3min

　　五,、制備細胞懸液：

　　1、吸棄上清液,。

　　2,、向離心管內加入10ml培養(yǎng)液，吹打制成細胞懸液,。

　　六,、細胞計數(shù)：

　　細胞濃度以5×105/ml為宜。

　　七,、培養(yǎng)細胞：

　　將復合細胞計數(shù)要求的細胞懸液分裝入培養(yǎng)瓶內,，將培養(yǎng)瓶放入37℃5%CO2的培養(yǎng)箱內2-4小時(或者24-48小時)后換液繼續(xù)培養(yǎng)培養(yǎng)，換液的時間由細胞情況而定,。

　　初學者易犯錯誤：

　　1,、水浴鍋未預熱或者未預熱到37℃。

　　2,、水浴鍋內凍存管太多,，導致傳熱不佳，使融化時間延長,。

　　3,、離心前忘記平衡，導致離心機損壞和細胞丟失,。

　　4,、一次復蘇細胞過多，忘記更換吸頭和吸管,，導致細胞交叉污染,。MVE液氮罐