以過濾海水（水溫15℃,、pH8.1,、鹽度27%）為激活液（下同）,，精液與激活液混合后在顯微鏡下觀察精子活力（激活率、活動(dòng)時(shí)間和壽命）,。激活率為給定視野中被激活精子的數(shù)量占全部精子數(shù)量的百分比；運(yùn)動(dòng)時(shí)間是指精子自激活開始至90%的精子原地顫動(dòng)為止所經(jīng)歷的時(shí)間,；精子的壽命指精子從激活開始至90%的精子停止運(yùn)動(dòng)的時(shí)間,。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。
稀釋液種類對(duì)精子超低溫冷凍保存效果的影響試驗(yàn)分別以HBSS,、MPRS,、Cortland液為稀釋液（如表一），以10%EG為抗凍劑（抗凍劑為終濃度,，下同）配制抗凍液,；將精液與抗凍液按1︰3比例混勻，4℃平衡30min,；將平衡后的精液-抗凍液混合物分裝入0.25mL麥細(xì)管中,，然后用兩步降溫法（即將盛精麥細(xì)管平放在自制簡(jiǎn)易降溫裝置的液氮面上7.5cm處，停留10min后投入液氮中）保存,。12h后,，將麥細(xì)管從液氮中快速取出，于40℃水浴中溶化后檢測(cè)精子激活率,。MVE液氮罐


稀釋比例對(duì)精子超低溫冷凍保存效果的影響試驗(yàn)以10%EG為抗凍劑,、Cortland液為稀釋液配制抗凍液，將精液與抗凍液按1：1,、1：2,、1：3、1：4,、1：5,、1：7、1：9混勻，按前文方法冷凍保存精子及解凍與激活率檢測(cè),。
抗凍劑種類及濃度對(duì)精子超低溫冷凍保存效果的影響試驗(yàn)以5%,、10%、15%及20%四個(gè)濃度的DMSO,、Gly,、EG、PG為抗凍劑,、Cortland液為稀釋液配制抗凍液,，將精液與抗凍液按1︰3混勻，然后冷凍保存精子及解凍與活力檢測(cè),。MVE液氮罐