探討液氮冷凍法制備家兔股骨頭壞死  MVE液氮罐

1材料與方法

1.1實驗動物：10只成年新西蘭大白兔,，雌雄不限,，年齡4~5個月，體質(zhì)量2.5~3.5kg。

1.2實驗方法：所用動物的雙側(cè)股骨頭均參加實驗,，將動物俯臥位固定,，取髖關(guān)節(jié)后側(cè)切口，暴露關(guān)節(jié)囊并十字切開,，內(nèi)旋股骨,，顯露股骨頭的負重區(qū)，在不切斷股骨頭(圓)韌帶,，髖關(guān)節(jié)不造成脫位的基礎(chǔ)上,，保護周圍組織，以液氮棉團連續(xù)快速冷凍股骨頭8次,，共約3min,，關(guān)閉手術(shù)切口。術(shù)后肌肉注射慶大霉素,，以預防術(shù)后感染,。

1.3股骨頭標本的制作和觀察：實驗動物在麻醉下，分別于術(shù)后3,、7d各處死1只,，術(shù)后2、4,、6,、8周各處死2只，進行股骨頭標本的大體解剖學觀察和X線檢查,。經(jīng)10%甲醛溶液固定股骨頭標本,，用8%甲酸溶液脫鈣處理，石蠟包埋,，組織切片,，HE染色后，進行光鏡觀察和攝像,。

2結(jié)果

2.1股骨頭標本的大體觀察：造模3d的股骨頭標本,，外形圓而光滑，關(guān)節(jié)軟骨呈蒼白色,，7d的標本與3d情況無明顯區(qū)別,。2周時，股骨頭外形圓滑,，有2例標本關(guān)節(jié)軟骨面出現(xiàn)少許剝脫,，關(guān)節(jié)軟骨呈蒼白色;4周時，有3例股骨頭標本關(guān)節(jié)面出現(xiàn)輕度塌陷,，所有關(guān)節(jié)軟骨均有輕度剝脫,。6周時，股骨頭外形仍呈圓形,，關(guān)節(jié)軟骨剝脫加重,。8周時，關(guān)節(jié)軟骨呈蒼白色,，剝脫嚴重,，關(guān)節(jié)軟骨下有骨暴露，并有1例失去其圓形輪廓,，呈現(xiàn)骨性關(guān)節(jié)炎樣改變(圖1),。

2.2股骨頭標本的X線觀察：造模3d的股骨頭外形圓，骨密度無明顯變化,，骨小梁結(jié)構(gòu)正常;7d時的標本,，X線表現(xiàn)與3d時無明顯差別。2周時,，股骨頭外形圓,，骨密度有所增加，骨小梁結(jié)構(gòu)完整,。4周時,，有3例股骨頭輕度變扁，并有骨刺樣結(jié)構(gòu)形成,，骨密度增加,，骨小梁結(jié)構(gòu)出現(xiàn)紊亂(圖2)。6周時,，股骨頭外形圓,，骨密度明顯增加，骨小梁結(jié)構(gòu)變得紊亂,，出現(xiàn)軟骨下囊性變,。8周時，股骨頭標本外形圓,，骨密度高,，骨小梁結(jié)構(gòu)紊亂，軟骨下呈囊性變;有1例股骨頭標本,，正常外形喪失,、變小。

2.3股骨頭標本的組織學觀察：在造模3d時的股骨頭組織切片上,，冷凍區(qū)和周圍部的軟骨細胞出現(xiàn)壞死,，骨細胞和骨髓組織也呈現(xiàn)壞死，遠離冷凍區(qū)的骨組織壞死較輕,。關(guān)節(jié)軟骨表面光滑,，骨小梁結(jié)構(gòu)正常，骨陷窩空虛。7d時的標本和3d時無明顯區(qū)別,。2周時,，可見骨髓纖維化，并有骨髓基質(zhì)細胞,，出現(xiàn)于壞死的骨小梁周圍(圖3),。有2例股骨頭標本，關(guān)節(jié)軟骨下有較多的破骨細胞聚集(圖4),。關(guān)節(jié)軟骨表面輕度毛糙,，部分軟骨細胞呈灶性增生，并出現(xiàn)爬行修復現(xiàn)象(圖5),。骨小梁結(jié)構(gòu)完整,，骨陷窩空虛，骨小梁周圍出現(xiàn)附加骨組織(圖6),，在部分標本的骨小梁間,，有新生類骨質(zhì)形成。4周時,，出現(xiàn)骨髓增生,，骨組織修復比2周時更加活躍，骨小梁和新生類骨質(zhì)較2周時更為增多,。關(guān)節(jié)軟骨表面毛糙,，部分出現(xiàn)剝脫。有少數(shù)的骨小梁變細或出現(xiàn)折痕,，骨陷窩空虛;有3例股骨頭標本,，軟骨下骨組織修復旺盛，軟骨下的骨小梁變細,、形態(tài)不規(guī)則或出現(xiàn)折痕(圖7),，甚至出現(xiàn)股骨頭關(guān)節(jié)面的塌陷(圖8)。6周時,，骨組織修復繼續(xù)進行,，部分軟骨剝脫，軟骨下出現(xiàn)骨暴露,。骨小梁變細,，出現(xiàn)折痕或吸收現(xiàn)象;骨陷窩空虛，骨小梁附加骨和新生類骨質(zhì)較多,。8周時,，關(guān)節(jié)軟骨剝脫嚴重，骨小梁紊亂,，骨陷窩空虛,，出現(xiàn)大量的骨小梁附加骨和新生類骨質(zhì),。MVE液氮罐