細(xì)胞分離：

外周血用電動(dòng)助吸器按照每管不多于35ml,，平均分至50ml離心管中，931×g,，離心8min,，吸取上層血漿至50ml離心管中，取1.5ml于EP管中,，標(biāo)記,，－80℃保存。用NA稀釋血細(xì)胞,，使得血細(xì)胞:NA為1：1,，混勻后均勻緩慢地加至相應(yīng)的A液上層,，形成完整的界面。596×g,，離心20min,。可見明顯分層,。吸棄第1層上清,，小心輕柔地將第2層的白色細(xì)胞層分別吸至不同的潔凈50ml離心管中。分別向各管中加NA,，稀釋混勻,，定容至40ml/管。931×g,，離心8min,。吸棄上清，加NA重懸細(xì)胞,。凍存處理前留取細(xì)胞懸液計(jì)數(shù)和活力測(cè)定。MVE液氮罐

細(xì)胞冷凍保存

純化后細(xì)胞重懸于含終濃度9.8%的等體積DMSO2ml和右旋糖苷的冷凍保存液中,，冷凍保護(hù)液配置成2組（1組含80%的無血清培養(yǎng)液,，另1組含80%自體血漿）輕輕混勻后置－20℃冰箱冷卻平衡5－15min到4℃以下，同時(shí)把凍存管放4℃冰箱平衡15min,。分裝入2ml凍存管內(nèi),，每管1ml，管壁做好標(biāo)識(shí),。放在樣本凍存盒,，轉(zhuǎn)移至程序降溫盒儀器，最終將細(xì)胞保存于－196℃液氮內(nèi),。MVE液氮罐